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双萤光素酶

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双萤光素酶报告基因

货号:GC1032

品牌:Servicebio

规格:

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一、项目介绍

  报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

  本实验采用萤火虫萤光素酶(Firefly Luciferase)和海肾萤光素酶(Rellina Luciferase)组成双萤光素酶报告基因实验系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通过加入特定的萤光素酶底物,萤光素酶与底物反应过程中会发出生物萤光,然后可以通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物萤光,从而比较不同组间基因表达的差异。

二、实验应用

  1、miRNA与靶基因3’UTR的靶向关系;

  2、转录因子/启动子活性研究。
 

三、实验流程

  1、重组质粒构建: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒;

  2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株,通常选择转染效率较高的293T细胞;

  3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,可设置不同的检测时间点检测;

  4、外界干预: 转染后,可选择性进行物理/化学/病毒等的相应刺激;

  5、细胞处理: 采用进口双萤光素酶检测试剂盒依照protocol操作;

  6、萤光检测: 使用bio-teck 酶标仪进行萤光强度检测;

  7、数据整理,结果分析。
 

四、客户提供信息

  1.预测的启动子或miRNA序列信息及结合位点;

  2.靶基因信息;

  3.载体选择;

  4.实验分组等细节;

  5.其他实验需求。
 

五、公司可供选择的载体
 

载体名称 载体大小 标签 原核抗性 应用
pGL3-Basic 4818bp Firefily Luciferase amp 双萤光素酶实验
pRL-SV40 3705bp Ranilla Luciferase amp 双萤光素酶实验
pGL3-promoter 5010bp Firefily Luciferase amp 双萤光素酶实验
psicheck 2.0 6273bp Firefily+Ranilla Luciferase amp 双萤光素酶实验

 

六、样本保存运输

  1、活细胞:一定要不透气方瓶寄,常温;

  2、冻存细胞:纯干冰件,保证干冰充足;

  3、质粒、miRNA等-20℃寄送。
 

七、交付结果

  实验报告,原始结果,分析结果。
 

八、实验周期

  收到样品后4-6周。
 

九、结果展示

Fig. Dual-luciferase Reporter Assay
 

试剂盒展示:

  左图:试剂盒外观照;右图:试剂盒反应图示
 

酶标仪展示:
 

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