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染色

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细胞爬片&滴片

货号:GP1079

品牌:Servicebio

价格:¥15

规格:

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  一、细胞爬片

  1、爬片前期处理:

  ①爬片固定:在孔中滴加3ml固定液,固定15min。吸净孔中固定液,纯水水洗3次(每次水洗的时候用尖头镊子挑起爬片清洗,然后用吸管吸净纯水,β半乳糖染色使用专用的固定液。)

  ②爬片破膜:在孔中滴加3ml破膜液,破膜15min。吸净孔中破膜液,纯水水洗3次(每次水洗的时候用尖头镊子挑起爬片清洗,纯水不吸出,留着后续使用)

  (针对六孔板,其它孔板滴加适量的固定液和破膜液。)

  2、爬片染色:

  后续染色步骤同石蜡切片相同,染色时间适当延长,清洗或者更换染液使用巴氏吸管吸净之前的染液。

  3、爬片封片:

  加入适量酒精或水(看染色过程中最后一步是使用水还是酒精)后挑起爬片,爬片靠在孔边缘,吸净酒精后放置于65℃烤箱烘干15min。(染色过程中注意细胞爬片的方向,保证细胞面朝上和染液充分接触)

  从烤箱中取出装有爬片孔板,在载玻片上写下每个孔板的编号,在载玻片上滴加一滴中性树胶后,用镊子夹起对应编号的爬片,细胞面朝下封片。(封片过程中注意细胞爬片的方向,保证细胞面朝下封片)

  二、其他细胞种类的涂片制备:

  1.取细胞悬液,2800r 4℃离心5min,弃上清液,根据底部沉淀的细胞量加入2ml甲醇固定。若肉眼看不见细胞沉淀时,用3000r/min,4℃离心10min

  2.取用甲醇重悬的细胞悬液,2800r 25℃离心5min,弃上清液,根据底部沉淀加入PBS:

  ①若肉眼看不见细胞沉淀时,用3000r/min,25℃离心10min,依然无沉淀时,留取底部约0.2ml的液体,再加入0.5ml的PBS混匀后用移液枪吸取200ul,滴于提前用组化笔画好的小圆圈中(3cmX2cm的椭圆);

  ②若细胞沉淀量很少,绿豆大小时,弃上清,留取底部沉淀,加入0.5mlPBS,用移液枪吹打混匀后,吸取200ul,涂于提前用组化笔画好的小圆圈中(3cmX2cm的椭圆);

  ③若细胞沉淀量很多,黄豆大小或更大时,弃上清,留取底部沉淀,加入2mlPBS,用移液枪吹打混匀后,吸取150ul,涂于提前用组化笔画好的大圆圈中(最大长边约5cm,最大短边约2cm的椭圆),在显微镜下观察细胞量的多少,若还是过厚,再用PBS对倍稀释该细胞悬液,直至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。

  3.用枪将细胞悬液铺满整个圆圈,涂片放置自然晾干。

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